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      TaqMan探針作為阻斷劑參與突變基因的PCR擴增和DNA熔解分析

含TaqMan探針的非對稱PCR以及DNA熔解分析被應(yīng)用于突變檢測，可有效用于臨床診斷。該方法簡單、成本低，在一個封閉的離心管中進(jìn)行，可zui大限度的減少反應(yīng)時間，減輕工作量，以及避免樣品間的交叉污染。盡管DNA熔解分析比DNA常規(guī)測序更加靈敏（兩者的突變檢測閾值分別為～5%和15%～20%），但相比與那些工作量大且昂貴的生物技術(shù)，如焦磷酸測序和微滴型數(shù)字PCR而言，其靈敏度相差甚遠(yuǎn)。Irina V. Botezatu等科學(xué)家證明，在一些特殊的非對稱PCR情況下，TaqMan探針可作為阻斷劑，能夠優(yōu)先阻斷野生型等位基因的擴增，從而導(dǎo)致突變型等位基因的大量擴增。因此，使得BRAF和NRAS突變基因的檢測靈敏度增加了10倍。

原文：

Irina V. Botezatu, Irina O. Panchuk, Anna M. Stroganova, et al. TaqMan probes as blocking agents for enriched PCR amplification and DNA melting analysis of mutant genes. BioTechniques 62:62-68 (February 2017).